Rapporteurs

THESE

Docteur de l’Université Joseph Fourier

Discipline : Biologie Cellulaire

Véronique SATRE

Analyse génétique et fonctionnelle du gène OCRL1 associé au syndrome de Lowe

Membres du Jury

Président du Jury Rapporteurs Examinateur Directeur de thèse

Pr Pierre-Simon JOUK Pr Didier LACOMBE Pr Yves MOREL Dr Bruno RANCHIN Pr Joël LUNARDI

SOMMAIRE

ABREVIATIONS ----------------------------------------------------------11

MILIEUX -------------------------------------------------------------------13

SITES INTERNET --------------------------------------------------------13

I. INTRODUCTION ------------------------------------------------------16

• 
  Le gène OCRL1 16
  
• 
  La protéine OCRL1 23
  

2. Phosphoinositides et inositol polyphosphate 5-phosphatases 33

• 
  Phosphoinositides 33
  
• 
  PI(4,5)P₂ 34
  
• 
  Inositol polyphosphate 5-phosphatases 37
  

3. Rho GTPases 42

• 
  GTPases de la superfamille Ras 42
  
• 
  Rho GTPases 43
  

• 
  Rho-GTPases et cytosquelette 45
  
• 
  Rho-GTPases et expression 48
  
• 
  Rho-GTPases et cycle cellulaire 49
  
• 
  Rho-GTPases et morphogenèse cellulaire 49 38
  
• 
  Rho-GTPases et vésicules 50
  
• 
  Rho-GTPases et prolifération cellulaire 51
  
• 
  Rho-GTPases et retard mental 52
  
• 
  Rho-GTPases et Rho-GAP 53
  

• 
  Protéines Rab 54
  

4. Le syndrome oculo-cérébro-rénal de Lowe 55

• 
  Atteinte oculaire 56
  
• 
  Atteinte rénale 59
  
• 
  Atteinte du système nerveux 62
  
• 
  Autres atteintes 65
  

5. La maladie de Dent 66

• 
  Extraction et préparation d’ADN  70
  
• 
  Amplification des séquences ADN d'intérêt par PCR 71
  
• 
  Stratégie de criblage de mutations au niveau génomique 73
  

• 
  Criblage de mutation par SSCA  73
  
• 
  Criblage de mutation par DHPLC 74
  
• 
  Recherche de mutation par séquençage automatique 75
  

• 
  Haplotypage et analyse de données de liaison génétique 75
  

• 
  Haplotypage à l'aide d'amorces marquées par le [³²P] 76
  
• 
  Haplotypage à l'aide d'amorces marquées par un fluorophore 77
  

• 
  Extraction, préparation et quantification des ARN 77
  

• 
  Extraction et préparation d'ARN pour séquençage 77
  
• 
  Séquençage des transcrits 78
  

• 
  Extraction et préparation d'ARN pour quantification 79
  
• 
  Quantification des transcrits par PCR quantitative 79